Modificazione genica di cellule staminali distrofiche allo scopo di trapianto autologo nella distrofia musculare di Duchenne

Lo scopo principale di questo progetto è sviluppare un nuovo approccio terapeutico alla Distrofia Muscolare di Duchenne (DMD) che unisca l'utilizzo delle cellule staminali e la terapia genica. Recentemente il nostro laboratorio ha pubblicato risultati incoraggianti riguardo l'ingegnerizzazione delle cellule staminali isolate dai pazienti distrofici mediante la tecnica di exon skipping. Attraverso questa tecnica è possibile modificare geneticamente le cellule staminali in modo tale che ri-esprimano un gene della distrofina più corto ma funzionale. In questo modo sarà possibile utilizzare le cellule del paziente stesso riducendo i problemi di rigetto da parte del sistema immunitario. Gli scopi principali del progetto sono i seguenti: 1) valutazione della sicurezza del trapianto di una sottopopolazione di cellule staminali umane isolate dal muscolo e dal sangue di pazienti distrofici ingegnerizzate mediante infezione con un vettore lentivirale esprimente due oligonucleotidi antisenso la cui funzione è impedire lo splicing dell'esone 51 nel gene della distrofina in visione di una futura applicazione clinica di questo protocollo sperimentale; 2) isolamento, caratterizzazione ed espansione delle cellule staminali CD133+ distrofiche isolate da cani golden retriever (GRMD) distrofici; 3) ingegnerizzazione delle cellule staminali isolate dai cani distrofici; 4) iniezione delle cellule staminali ingegnerizzate in cani GRMD per valutare il potenziale rigenerativo di queste cellule in un contesto muscolare distrofico; 5) valutazione del recupero della forza nei cani distrofici trattati in confronto a cani distrofici non trattati della medesima età. Dal momento che, a tutt'oggi, ancora non si conosce una cura efficace per la distrofia muscolare di Duchenne, siamo convinti, alla luce degli incoraggianti risultati sperimentali ottenuti che la combinazione della terapia cellulare e genica possa essere considerata un possibile trattamento.