Ricerca di nuovi farmaci per le distroglicanopatie tramite uno screening basato sull’attivazione del promotore del gene LARGE

Il progetto è finalizzato a definire un sistema di screening di composti in grado d’incrementare la proteina LARGE in cellule muscolari. LARGE è un enzima coinvolto nella glicosilazione di α-distroglicano (α-DG), una proteina transmembrana espressa in cellule mioblastiche e neuronali. A-DG, una volta appropriatamente glicosilato, lega proteine della matrice extracellulare. La perdita di tale legame causa instabilità della membrana plasmatica e scatena danni secondari che da ultimi causano la morte delle fibre muscolari. Le distroglicanopatie sono distrofie muscolari congenite dovute a mutazioni in 8 glicosiltransferasi o proteine accessorie e sono associate a ipoglicosilazione dell'α-DG. Il fenotipo clinico può essere molto severo con anomalie del sistema nervoso centrale e oculari e morte infantile precoce. La forma più lieve di questo spettro clinico si può presentare nella vita adulta come distrofia muscolare dei cingoli. Molti dati della letteratura hanno dimostrato che un incremento dei livelli di LARGE può by-passare funzionalmente la ipoglicosilazione dell'α-DG causata da difetti in altre glicosiltransferasi, migliorando così il fenotipo muscolare. Al momento però non sono stati identificati farmaci o composti in grado d'incrementare i livelli di LARGE. A questo scopo, proponiamo di utilizzare un sistema di screening high-throughput per piccoli composti o farmaci già esistenti in grado di attivare la trascrizione di LARGE. Tale metodologia ha il vantaggio di ricercare in un breve periodo di tempo una vasta collezione di agenti. D'altra parte, gli screening devono produrre un segnale forte e riproducibile che deve essere pianificato accuratamente nella prima fase del progetto. In questo exploratory grant, svilupperemo quindi le condizioni ottimali per la definizione di un saggio accurato per l’attivazione del promotore LARGE in cellule mioblastiche. Il vero e proprio screening, la conferma dei risultati saranno l'oggetto di una nostra futura proposta.